RIPA裂解液

RIPA 裂解液 (RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay) 是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要用于从动物细胞和组织中提取可溶性蛋白，其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western Blot、IP 及 Elisa 等实验。RIPA 裂解液的配方有很多种，根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以使用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

货号规格

使用说明

取适当量的裂解液（每1×106个细胞需要约50-100uL或每20mg组织样本需要约150-250uL）， 在使用前数分钟内将蛋白酶抑制剂加入其中。

注：如所需提取的为磷酸化蛋白，还需在 RIPA 裂解液中加入磷酸酶抑制剂。

1. 样本裂解 (需在冰上操作)：

• 对于贴壁细胞

1. 弃去培养基，用PBS（货号：AM-PBS-0500，或生理盐水、无血清培养液）洗一遍（如果血清中的蛋白对实验没有干扰，也可以不洗）；
2. 尽可能地弃去PBS(多余的液体将降低裂解液的浓度)；
3. 按照每1×10⁶个细胞需要约50-100uL的比例加入RIPA裂解液，比如6孔板每孔细胞量大约需加入150-250uL裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2s后，细胞就会被裂解；
4. 将所有液体转入新的离心管中；

• 对于悬浮细胞

1. 将细胞转移至离心管中，离心收集细胞，弃去培养基；
2. 用 PBS（货号：AM-PBS-0500，或生理盐水、无血清培养液）洗一遍（如果血清中的蛋白对实验没有干扰，也可以不洗）；
3. 尽可能的弃去PBS(多余的液体将降低裂解液的浓度)；
4. 按照每1×10⁶ 个细胞需要约50-100uL的比例加入RIPA裂解液，比如 6 孔板每孔细胞量大约需加入150-250uL裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成5×10⁵ - 1×10⁶个细胞/管，然后再裂解；

• 对于组织样品

1. 把组织剪切成细小的碎片；
2. 按照每20mg组织样本加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液；

注：如果样本裂解不充分，可以适当提高裂解液的用量；若需要高浓度的蛋白样品，也可适当降低裂解液的用量。

3. 用玻璃匀浆器匀浆，直至样本充分裂解；

注：若组织样本非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液，通过强烈涡旋振荡使其裂解充分。

2. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 min，小心地将上清液（蛋白样品）移入新的离心管中，即可进行后续的 PAGE 凝胶电泳、Western Blot和免疫沉淀等操作。得到的蛋白样品可分装并长期保存于﹣80℃。

注意事项

1. 4℃保存时，裂解液中的SDS易析出，使用前请置于37℃使其完全溶解，待恢复到室温即可使用。
2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，此为正常现象，该物质为基因组DNA等形成的复合物。如不检测和基因组 DNA 紧密结合的蛋白，可以直接离心取上清用于后续实验；若需要检测此类蛋白，则可以通过超声处理打散该透明胶状物，随后离心取上清即可用于后续实验。但如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53等，通常不必进行超声处理就可完成检测。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅限科研使用。

产品选择参考